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基因編輯動(dòng)物凈化之——胚胎移植
繁殖出現(xiàn)困難，花費(fèi)時(shí)間金錢(qián)制備的小鼠傳不下去了，怎么辦?
動(dòng)物房疑似污染，小鼠急需凈化到更高級(jí)的動(dòng)物房，怎么凈化?
小伙伴們別擔(dān)心!小編教你用胚胎移植的方法解決這個(gè)問(wèn)題!
胚胎移植是目前國(guó)際上公認(rèn)的最有效的生物凈化方法之一。它是一項(xiàng)非常必要的關(guān)鍵技術(shù)，轉(zhuǎn)基因、核移植，或體外受精等任何一項(xiàng)操作所生產(chǎn)的胚胎，都必須經(jīng)過(guò)胚胎移植技術(shù)才能獲得后代。
一、胚胎移植
即雌鼠超數(shù)排卵后，通過(guò)體外受精((In Vitro Fertilization, IVF)技術(shù)手段獲得受精卵，再將受精卵多次清洗后移植到SPF級(jí)假孕母鼠體內(nèi)，得到后代經(jīng)微生物檢測(cè)合格，完成凈化。
1.超數(shù)排卵：向供卵雌鼠腹腔注射PMSG(5IU/只)，48h后腹腔再注射HCG(5IU/只)，使其超數(shù)排卵。注射后當(dāng)天與正常雄鼠同籠交配，次日檢查陰道栓。
2.制備假孕雌鼠：將8周齡的雌鼠與輸精管結(jié)扎的雄鼠同籠，使其交配進(jìn)行假孕誘導(dǎo)。
3.采集受精卵：將見(jiàn)陰道栓的1.5d供卵鼠處死后，在顯微鏡下將輸卵管移入培養(yǎng)液，小心撕開(kāi)輸卵管后用移卵針收集2-細(xì)胞胚胎，再移入mCZB培養(yǎng)液中，37℃，CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.胚胎移植：麻醉假孕同期受體鼠，背中線肋骨處剪一縱切口，找到白色脂肪體并剪開(kāi)，拉出卵巢、輸卵管、子宮。在體式顯微鏡下找到輸卵管傘口，用移卵針將2-細(xì)胞期胚胎從傘口位置移植至輸卵管膨大部中，將卵巢、輸卵管、子宮復(fù)位。一般每側(cè)移入8-10枚胚胎，最后縫合創(chuàng)口，涂上青霉素和鏈霉素。
二、胚胎移植的應(yīng)用
1.凈化和快繁
SPF動(dòng)物一般是經(jīng)過(guò)生物凈化的方式獲得。凈化的主要技術(shù)是：體外受精(IVF)+胚胎移植技術(shù)。將雄鼠處死后取出精子，將精子激活后與超排的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精拿到受精卵，再移植到SPF級(jí)代孕小鼠的子宮中，這樣可以得到SPF級(jí)的小鼠后代。
快速繁育的核心是借助IVF技術(shù)短時(shí)間獲得大量子代小鼠，其特點(diǎn)是可以減少組內(nèi)小鼠周齡差異，提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的一致性。尤其是基因工程小鼠，通過(guò)IVF技術(shù)獲得胚胎，再進(jìn)行胚胎移植后，可一次性獲得大量相同基因型小鼠。
在小鼠進(jìn)入動(dòng)物房前，選擇IVF凈化服務(wù)，在凈化的同時(shí)，還能達(dá)到快速繁育的目的，同時(shí)獲得更多數(shù)目的子代鼠，效率高，縮短繁育周期，極大地加快科研進(jìn)度。
2.挽救雄鼠不育的品系
單精子顯微注射技術(shù)(Intracytoplasmic sperm injection，ICSI)，指使用顯微操作系統(tǒng)將單個(gè)精子注射到卵細(xì)胞胞漿內(nèi)，使卵子受精，體外培養(yǎng)到早期胚胎，再移植到代孕小鼠體內(nèi)發(fā)育成小鼠的技術(shù)。該技術(shù)用于挽救因精子無(wú)活力或者活力低造成雄性不育的小鼠品系。
3.胚胎(精子)的冷凍和復(fù)蘇
胚胎(精子)凍存常用于珍貴品系的保種，通過(guò)一定的降溫程序及保護(hù)措施將胚胎(精子)進(jìn)行凍存，這種方法可以緩解實(shí)驗(yàn)小鼠空間占有率，降低成本，避免珍貴小鼠品系因外界環(huán)境、疾病等因素造成的死亡或斷代損失。胚胎(精子)復(fù)蘇是指通過(guò)程序化升溫的方法將凍存的胚胎(精子)解凍，體外培養(yǎng)一段時(shí)間后移植到代孕小鼠體內(nèi)，進(jìn)而獲得凍存品系小鼠活體的技術(shù)。其中，相比于精子凍存復(fù)蘇來(lái)說(shuō)，胚胎復(fù)蘇后存活率高、移植后懷孕率高的優(yōu)勢(shì)，但其冷凍技術(shù)受限于專(zhuān)業(yè)機(jī)器--程序冷凍儀，建議交給專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)來(lái)進(jìn)行。
綜上所述，小鼠的胚胎移植技術(shù)是制備基因修飾動(dòng)物、凈化、保種過(guò)程中的必需的、關(guān)鍵的技術(shù)手段，對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)研究及生命科學(xué)研究具有重要價(jià)值。
我們擁有10年以上屏障動(dòng)物房管理與運(yùn)營(yíng)維護(hù)的經(jīng)驗(yàn)，具有完善的質(zhì)量管理體系，嚴(yán)格遵循飼養(yǎng)繁育和動(dòng)物安全管理操作流程，嚴(yán)密監(jiān)控屏障內(nèi)環(huán)境，定期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和環(huán)境微生物，保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康，為您的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提供更可靠的依據(jù)。
我們可提供以下遺傳育種相關(guān)技術(shù)服務(wù)：快速繁育服務(wù)，自然繁育服務(wù)，飼養(yǎng)服務(wù)，凍存、保種、復(fù)蘇、生物凈化服務(wù)，鑒定服務(wù)等。
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